题目内容
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[单选题]
采用BamHI单切载体和目的基因后，进行重组连接前要（)
A.65℃处理10分钟使BamHI灭活
B.用碱性磷酸酶处理载体防止其自身环化
C.电泳检测酶切结果
D.A、B、C都正确
E.只有A、C正确
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A.载体和目的基因的分离、提纯与鉴定
B.分、切、接、转、筛
C.将重组体导入宿主细胞，筛选出含目的基因的菌株
D.将载体和目的基因接合成重组体
你纯化出经BamHI消化重组质粒DNA所得的两个DNA片段，其中一个长为400bp，另一个长900bp，你想要如图16-3-20(1)所示将它们连接起来产生一个杂合基因，如果你的推测是正确的话，就会得到令人惊奇的新物质。
你在DNA连接酶存在情况下将两种片段混合在一起并且进行孵育，30分钟后和8小时后，你取一些样品进行琼脂糖凝胶电泳分析，你惊讶地发现连接得到了一系列复杂的DNA片段而不是所需的1.3kb小片段，并且发现孵育时间越长，小片段浓度越低而大片段浓度增加，如果你用BamHI切割连接后的重组体，你会重新获得开始的两片段(图16-3-20(2)A)。
令人吃惊的是，你将从琼脂糖凝胶中纯化得到的1.3kb片段用BamHI消化，检查它的结构，与预想的一样，可以得到最初的两片段(图16-3-20(2)B)。这就可以确定这是你所需的结构。但是，你用EcoRl消化另一份样品，你希望通过消化得到300bp的片段和700bp的片段，但你跑的电泳是一系列DNA片段(图16-3-20(2)B)。
A.目的基因获得
B.表达载体构建
C.目的基因导入宿主细胞
D.筛选稳定表达的细胞
质粒pHUBI DNA是双链环状，长5.7kb(5.7×103个碱基对)。这个质粒带有某基因，它的蛋白质产物使宿主细菌对四环素具有抗性(Tet-r)。该DNA对下列每种限制酶具有一个识别位点：EcoRI、HpaI、BamHI、PstI、SalI、BglII。在BarnHI和SalI位点处克隆会破环四环素抗性；在其他酶的位点处克隆则保留四环素抗性。用各种限制酶以及酶混合物消化可得到如表16-2-11所列的DNA片段。试在pHUBIDNA图上标出所有这些酶的切点。将DNA图画成环形，在圆周上以5.7kb总长标出刻度。
| 表16-2-11 | |
| 酶混合物 | 片段长度(kb) |
| EcoRI EcoRI，BamHI EcoRI，HpaI EcoRI，SalI EcoRI，BglII EcoRI，PstI PstI，BglII BglII，HpaI | 5.7 0.4，5.3 0.5，5.2 0.7，5.0 1.1，4.6 2.4，3.3 1.3，4.4 0.6，5.1 |
A.基因替代
B.基因治疗
C.遗传治疗
D.遗传替代
