现在,要测一未知胰岛素样品(分子量11466U)。用半衰期为7天的放射性碘作示踪物。假设:每摩尔胰岛素用一个碘原子,碘不干扰胰岛素结合,每一个放射性裂变有50%作为计数的可能性,且RIA(放射免疫检测法)的检测限为:在结合的和游离的部分中至少一分钟有1000个计数。
原位杂交:
A.是这样一种技术:标记DNA与整个染色体杂交,在显微镜下可见杂交的位点。
B.证明了卫星DNA是完全散开分布的。
C.证明了卫星DNA位于染色体着丝粒处。
A.大量未标记的RNA与限量的基因组DNA杂交。
B.少量标记的RNA与过量的基因组DNA杂交。
C.过量的DNA足够使所有被标记的RNA被杂交。
D.跟踪者RNA与转录得到它的DNA簇重新结合。
E.大多数的追踪RNA与中等重复序列杂交。
A.重组DNA片段,研究其表型效应
B.诱发DNA突变,研究其表型效应
C.设法把DNA与蛋白质分开,研究各自的效应
D.应用同位素示踪技术,研究DNA在亲代与子代之间的传递
A.用限制酶消化DNA。
B.把DNA连接入一个载体。
C.在胶上分离DNA片段
D.把DNA片段转移到硝酸纤维素膜上。
E.膜与标记的探针杂交。
爪蟾卵母细胞在卵的发育后期用3H-尿苷同步标记。从卵母细胞中分离的放射性细胞质总RNA与由成体爪蟾提取的且呈单链形式结合在滤膜上的DNA进行杂交。该RNA:DNA杂交分子与原肠胚期爪蟾胚胎的非标记细胞质总RNA相竞争。图13-3-68A是假设的结果。在另一相应但相反的实验中,放射性原肠胚期细胞质RNA(原肠胚期胚胎用3H-尿苷标记)与滤膜上的总DNA杂交,该RNA:DNA杂交分子与非标记的后期卵细胞质RNA相竞争,结果如图13-3-68B。
mRNA往往是用各种杂交技术检测的,也就是通过mRNA与单链DNA一起保温,形成DNA-RNA杂交物。有一种技术,把单链DNA吸附在硝酸纤维素滤膜上,加上放射性标记的RNA,然后在导致杂交作用的条件下将混合物保温。游离RNA并不结合到滤膜上,所以滤膜洗涤后所结合的放射性量就是被杂交的RNA量。在某实验中,从感染噬菌体1分钟的细胞中分离出放射性mRNA,然后与分别吸咐在滤膜上的三种不同的DNA分子杂交。DNA分子如图9-3-10所示,其中的数字表示离DNA左侧的距离,相对距离范围为0~100。用野生型噬菌体(Ⅰ)感染细菌。在噬菌体DNA分子Ⅱ和Ⅲ中的阴影区代表噬菌体携带的细菌DNA。接着在两张滤膜上对各类DNA进行杂交试验,吸附有每一类DNA的一张滤膜与核酸酶一起保温(RNase,该酶酶解单链RNA但不酶解杂交的RNA);另一张滤膜不用酶处理(-RNase)。得到的数据如表9-3-10所示。试问mRNA从野生型DNA中的哪个区域转录?
表9-3-10 | ||
滤膜上的DNA | 滤膜上的cpm | |
-RNase | +RNase | |
Ⅰ Ⅱ Ⅲ | 1250 1260 1240 | 1245 418 820 |