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[主观题]

特殊转录因子的纯化给人带来很多困难,因为分析速度慢,并且转录因子本身不稳定,当你鉴定出你所需片段时,这个

因子通常已经失活。你可以想出一个极好的方法以加快分析速度。你可以合成一段不含胞嘧啶核苷酸的DNA序列,将这段序列放到启动子后在一适当反应混合物中温育,这个启动子将指导不含鸟嘌呤核苷酸的转录本的合成,如果不加GTP,只产生一定长度的RNA转录本,这个RNA转录本来自于合成的DNA序列。因为其他转录本都在需G处被终止。如果你能使这个想法得到实现,则快速分析特殊序列的转录仅通过测量标记核苷酸的放射性就可实现。

为了验证你的想法,你构建两个携带合成DNA的质粒。一个具有腺病毒的启动子(PmL1),另一个无启动子(PC1)。把两种质粒同纯化的RNApolⅡ、纯化好的转录因子样品及32P-CTP混合,除此之外,再加入各种组合的GTP、RNaseT1(可以切开RNA与G的连接)和3'-氧甲基GTP(无论何时它参入正在形成的链,它就会终止转录),通过凝胶电泳测定结果如图13-3-42所示。

特殊转录因子的纯化给人带来很多困难,因为分析速度慢,并且转录因子本身不稳定,当你鉴定出你所需片段时,

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第1题
你已经建立了一个体外转录系统。使用一个已知的DNA片段,它可在一个病毒启动子的控制下被转录。当在系统中加入
纯化的RNApolⅡ、TFⅡD(TATA结合因子)和TFⅡB、TFⅡE(与RNA聚合酶结合)后,DNA开始被转录。然而,体外转录系统的低效率暗示可能有一个额外的调控序列与转录因子结合,而这种转录因子在纯化的组合当中并不存在,为了寻找与这个被推测的调控因子结合的DNA序列。你做了一系列在转录起始点上游的缺失(如图13-3-44B所示),比较它们在纯化系统中及在细胞粗提物中的转录活性。作为内部控制,你将每种缺失体与一个能产生生长转录本的未缺失的模板混合(如图13-3-44A)。这些分析的结果(图13-3-44C)显示,一直缺失到-61,对转录仍无影响,而-11的缺失在两种系统中都会使转录受到抑制。使人惊奇的是一50位的缺失体可以像未损失的模板一样在纯化系统内进行有效的转录。但是在细胞粗提物中却没有这种作用。

你纯化了与这种效应有关的蛋白,显示它使非缺失的模板及-61缺失的模板转录都增强了10倍,面对-50缺失的模板无激活作用,印迹分析表明这个因子同一个TATA位点上游的特殊的短序列相结合,虽然这种因子在TFⅡD缺乏时同它的结合位点的结合是短暂的,但当TFⅡD存在时,它可与结合位点稳定地结合。

你已经建立了一个体外转录系统。使用一个已知的DNA片段,它可在一个病毒启动子的控制下被转录。当在系统

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第2题
利用一个包含纯化的RNA聚合酶的核心酶、DNA模板、σ因子以及标记核苷酸(32pppN)的系统,来研究σ因子在原核转录

利用一个包含纯化的RNA聚合酶的核心酶、DNA模板、σ因子以及标记核苷酸(32pppN)的系统,来研究σ因子在原核转录中的作用。在10-10mol和10-11mol两种不同浓度的核心酶催化下32P掺入到RNA的图如下所示,σ因子浓度恒定为10-12mol。

利用一个包含纯化的RNA聚合酶的核心酶、DNA模板、σ因子以及标记核苷酸(32pppN)的系统,来研

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第3题
蛋白质合成的整体准确性是很难衡量的,一方面,因为极端的准确和错误都是罕见的,而且细胞似乎能够很快消灭它
们的错误;另一方面,技术上也有困难。比如能够确切鉴定一种蛋白质到哪种程度,从概念上说,这与知道如何提纯、鉴定是两码事。解决这个问题的一个聪明的方法是利用细菌鞭毛虫惟一蛋白:鞭毛蛋白(相对分子质量为40000)。鞭毛蛋白有两个优点:首先,鞭毛(即鞭毛蛋白)能被从细菌上切下并用差速离心纯化,另外,鞭毛蛋白中不含Cys,因此允许利用Cys错误加入肽链进行灵敏的检测。为了放射性标记Cys,细菌在含35蛋白质合成的整体准确性是很难衡量的,一方面,因为极端的准确和错误都是罕见的,而且细胞似乎能够很快消灭(放射活性为5.0×103cpm/pmol)和过量的未标记Met的生长培养基中恰好生长一个世代(这种情况下无可测出的放射性进入Met),把所得的鞭毛蛋白纯化并进行SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,发现从凝胶上回收的8μg鞭毛蛋白中含有35S带来的放射性为300cpm。请问:
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第4题
在真核细胞中DNA折叠成为染色质是如何影响转录的?你可以应用C-负转录单元解决这个问题。这个模板在RNApolⅡ及

在真核细胞中DNA折叠成为染色质是如何影响转录的?你可以应用C-负转录单元解决这个问题。这个模板在RNApolⅡ及四个转录因子(TFⅡA、TFⅡB、TFⅡD和TFⅡE)存在下能很好地转录。

为了检验染色质对转录的影响,首先将模板装配成核小体(核小体来自蛙卯母细胞抽提物)并纯化染色质模板,然后加入转录组分,结果没有发生转录(图13-3-48)。然后改变步骤,首先,在缺少NTPs的情况下将模板和转录组分一起温育,然后将模板装配为核小体,再纯化染色质模板。现在,当要再加入转录组分时,转录顺利进行就如在裸露的DNA模板上进行的转录一样,这样得出结论:一个或多个转录组分一定同模板结合,然后使启动子可以接近。

在真核细胞中DNA折叠成为染色质是如何影响转录的?你可以应用C-负转录单元解决这个问题。这个模板在R

为了更进一步了解这种现象,再做两个附加实验。在第~个实验中,在温育过程中少加一种转录组分;在第二个实验中,在进行转录分析中少加一种转录组分。

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第5题
《大伙和金刚钻》金刚钻的光亮,虽然在大伙面前微不足道,但是却能给人带来荣耀,最后他成了()上面最美的一块,而大火因为会造成破坏,所以人们尽全力扑灭了它

A.皇冠

B.权杖

C.戒指

D.华服

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第6题
下列关于σ因子的叙述,正确的是( )

A.参与识别DNA模板上转录RNA的特殊起始点

B.参与识别DNA模板上的终止信号

C.催化RNA链的双向聚合反应

D.是一种小分子的有机化合物

E.参与逆转录过程

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第7题
关爱,就是关心爱护。我们要以真诚的态度、积极的行动关爱他人,因为关爱他人()①能达到换取他人关心帮助、获得更多发展机会的目的 ②有利于形成良好的人际氛围,促进社会文明进步 ③能使人们在交往过程中互谅互让,增进信任 ④能传递美好情感,给人带来温暖和希望

A.①②③

B.①②④

C.①③④

D.②③④

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第8题
现代的空气污染日趋严重,但是更多的绿化可以改善环境,这是因为()。A.树木可以美化环境B.绿色可以

现代的空气污染日趋严重,但是更多的绿化可以改善环境,这是因为()。

A.树木可以美化环境

B.绿色可以给人带来“清洁”的感觉

C.树木等植物可以吸收一些有毒物质,净化空气

D.植物可以维持生态平衡

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第9题
变更控制委员会(CCB)已经批准了一个变更请求,在一个产品中增加一个新的组件。运营经理在批准后发现了这个变更,并抱怨说实施这个变更会对生产线造成很大的干扰。项目经理应该先做什么?

A.把这个问题上报给项目发起人,因为增加组件的决定会带来很多好处,尽管它会对生产线造成破坏

B.与设计团队一起主持一个根本原因分析研讨会,以确定导致决定增加一个与生产线不兼容的组件的故障

C.与运营经理会面,解释改变的背景,并了解运营经理对改变的担忧

D.正式承认运营经理的担忧,并提出一个新的风险,即由于制造上的困难,项目可能会延迟交付并超出预算

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第10题
益生菌缺乏可能给宝宝带来的问题()

A.大便干燥、排便困难

B.喝牛奶就拉肚子,秋季腹泻

C.过敏或湿疹、哮喘,体质不好,总爱生病

D.吃得很多,但吸收不好

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