假定你制取了两个DNA样品,一个正常,另一个变性,各用0.01mol/L NaCl溶液透析过。透析前并不知道A260值。然后,
假定你制取了两个DNA样品,一个正常,另一个变性,各用0.01mol/L NaCl溶液透析过。透析前并不知道A260值。然后,每个样品中各加入少量酶,这时,两个样品搞混了。如何用吸收值来区别这两个样品?假定检测中用去了一小部分样品,且酶不会干扰测定。再设计第二种检测方法,确定它不需引入其他试剂或引起变性的条件。
假定你制取了两个DNA样品,一个正常,另一个变性,各用0.01mol/L NaCl溶液透析过。透析前并不知道A260值。然后,每个样品中各加入少量酶,这时,两个样品搞混了。如何用吸收值来区别这两个样品?假定检测中用去了一小部分样品,且酶不会干扰测定。再设计第二种检测方法,确定它不需引入其他试剂或引起变性的条件。
你纯化出经BamHI消化重组质粒DNA所得的两个DNA片段,其中一个长为400bp,另一个长900bp,你想要如图16-3-20(1)所示将它们连接起来产生一个杂合基因,如果你的推测是正确的话,就会得到令人惊奇的新物质。
你在DNA连接酶存在情况下将两种片段混合在一起并且进行孵育,30分钟后和8小时后,你取一些样品进行琼脂糖凝胶电泳分析,你惊讶地发现连接得到了一系列复杂的DNA片段而不是所需的1.3kb小片段,并且发现孵育时间越长,小片段浓度越低而大片段浓度增加,如果你用BamHI切割连接后的重组体,你会重新获得开始的两片段(图16-3-20(2)A)。
令人吃惊的是,你将从琼脂糖凝胶中纯化得到的1.3kb片段用BamHI消化,检查它的结构,与预想的一样,可以得到最初的两片段(图16-3-20(2)B)。这就可以确定这是你所需的结构。但是,你用EcoRl消化另一份样品,你希望通过消化得到300bp的片段和700bp的片段,但你跑的电泳是一系列DNA片段(图16-3-20(2)B)。
假定某种噬菌体颗粒含有小的线性单链DNA分子。通过CsCl离心研究它的复制方式。在CsCl中,它的密度是1.714g/cm3。含14C标记DNA的噬菌体感染生长在含3H的培养液中的细菌。于不同时间里取样,分离出DNA,对各样品进行离心。所得结果示于图6-3-42。试问这种噬菌体怎样复制它的DNA?你认为子代噬菌体会不会有14C标记?
来自小鼠和大鼠的DNA样品中的G+C分别占总碱基数的44%和40%,计算这两个DNA在0.2molNaCl中的Tm。由于不小心将两个样品混合了,你能想个办法将它们分开吗?
因子通常已经失活。你可以想出一个极好的方法以加快分析速度。你可以合成一段不含胞嘧啶核苷酸的DNA序列,将这段序列放到启动子后在一适当反应混合物中温育,这个启动子将指导不含鸟嘌呤核苷酸的转录本的合成,如果不加GTP,只产生一定长度的RNA转录本,这个RNA转录本来自于合成的DNA序列。因为其他转录本都在需G处被终止。如果你能使这个想法得到实现,则快速分析特殊序列的转录仅通过测量标记核苷酸的放射性就可实现。
为了验证你的想法,你构建两个携带合成DNA的质粒。一个具有腺病毒的启动子(PmL1),另一个无启动子(PC1)。把两种质粒同纯化的RNApolⅡ、纯化好的转录因子样品及32P-CTP混合,除此之外,再加入各种组合的GTP、RNaseT1(可以切开RNA与G的连接)和3'-氧甲基GTP(无论何时它参入正在形成的链,它就会终止转录),通过凝胶电泳测定结果如图13-3-42所示。
A.严格按照A—T、G—C的配对规律合成新链
B.以四种dNTP为原料,在模板链指导下合成新链
C.亲代DNA双链分开,分别作为模板合成新链
D.复制生成的两个子代DNA分子,一个来自亲代,另一个是新合成的
E.复制生成的两个子代DNA分子与亲代DNA完全相同