PUC质粒作为基因克隆载体应有下列何种调控元件()
A.AmPr
B.ori复制子
C.LacZ标记
D.多克隆位点
A.AmPr
B.ori复制子
C.LacZ标记
D.多克隆位点
质粒pHUBI DNA是双链环状,长5.7kb(5.7×103个碱基对)。这个质粒带有某基因,它的蛋白质产物使宿主细菌对四环素具有抗性(Tet-r)。该DNA对下列每种限制酶具有一个识别位点:EcoRI、HpaI、BamHI、PstI、SalI、BglII。在BarnHI和SalI位点处克隆会破环四环素抗性;在其他酶的位点处克隆则保留四环素抗性。用各种限制酶以及酶混合物消化可得到如表16-2-11所列的DNA片段。试在pHUBIDNA图上标出所有这些酶的切点。将DNA图画成环形,在圆周上以5.7kb总长标出刻度。
表16-2-11 | |
酶混合物 | 片段长度(kb) |
EcoRI EcoRI,BamHI EcoRI,HpaI EcoRI,SalI EcoRI,BglII EcoRI,PstI PstI,BglII BglII,HpaI | 5.7 0.4,5.3 0.5,5.2 0.7,5.0 1.1,4.6 2.4,3.3 1.3,4.4 0.6,5.1 |
为了形成稳定突变,需从重组克隆宿主(E.coli)中构建Pseudomonas aeruginosa的基因文库,并把该基因文库中克隆的突变基因转入一野生型组织。用已知的接合和质粒不相容性知识设计一方案。
A.基因载体的选择与构建
B.目的基因与载体的连接
C.重组DNA分子导入受体细胞
D.筛选并克隆含重组体的受体细胞
E.表达目的基因编码的蛋白质
A.载体和目的基因的分离、提纯与鉴定
B.分、切、接、转、筛
C.将重组体导入宿主细胞,筛选出含目的基因的菌株
D.将载体和目的基因接合成重组体